การพัฒนาเทคนิคมัลติเพล็กซ์รีเวิร์สเรียลไทม์พีซีอาร์ ในการตรวจวิเคราะห์ตัวอย่างปัสสาวะจากผู้ป่วยไตอักเสบลูปัส
คำสำคัญ:
เทคนิคมัลติเพล็กซ์รีเวิร์สเรียลไทม์พีซีอาร์, ปัสสาวะ, ไตอักเสบลูปัสบทคัดย่อ
งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาวิธี In-house Multiplex RT-qPCR ที่สามารถตรวจวัด mRNA ของยีนทั้ง 4 ชุด ชุดที่ 1 (18s rRNA, MCP-1) ชุดที่ 2 (IP-10, VEGF) ชุดที่ 3 (FoxP3,NGAL) และชุดที่ 4 (GATA3, TBX-21) พร้อมทั้งสามารถนำไปประยุกต์ใช้ในงานด้าน คลินิกในการตรวจ วิเคราะห์ตัวอย่างปัสสาวะของผู้ป่วย LN ได้
วิธีดำเนินงานวิจัย ทำการทดสอบหาค่า ΔCt และ Correlation เปรียบเทียบ ระหว่าง 2 เทคนิค In-house Multiplex และ Single RT-qPCR โดยใช้สถิติ Simple linear regression จากนั้นทดสอบโดยใช้ตัวอย่างปัสสาวะของผู้ป่วย LN จำนวน 15 ราย โดยแบ่งเป็น 2 กลุ่มคือกลุ่ม Active LN และ Non-active LN
ผลการวิจัย ค่า ΔCt ของ VEGF, NGAL และ TBX-21 อยู่ในเกณฑ์ที่ยอมรับได้ 18s rRNA, IP10 และ GATA-3 มีส่วนน้อยที่อยู่นอกเหนือเกณฑ์ และ MCP-1 และ FoxP3 มีค่าอยู่ นอกเหนือจากเกณฑ์จำนวนมากและมีค่าสูง และผลทดสอบ correlation พบว่ายีนชุดที่ 1,2 และ 4 ไม่มีความแตกต่างกันทั้ง 2 เทคนิค ยกเว้นในกลุ่มที่ 3 FoxP3 มีความสัมพันธ์ระดับต่ำ การเปรียบเทียบระดับ mRNA กับลักษณะทางคลินิกของผู้ป่วย LN พบว่า MCP-1, IP-10, VEGF, NGAL และ TBX-21 มีปริมาณ mRNA ในปัสสาวะสูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญใน active LN และลดลงใน non-active LN ส่วน GATA-3 พบว่ามีระดับ mRNA ในปัสสาวะลดลงอย่างมีนัยสำคัญใน active LN และเพิ่มขึ้นใน non-active LN ส่วนในยีน FoxP3 เนื่องจากประสิทธิภาพของเทคนิค RT-qPCR มีค่า Efficiency ต่ำ จึงไม่รวมการศึกษายีน FoxP3 ในปัสสาวะของผู้ป่วย LN ในงานวิจัยนี้
เอกสารอ้างอิง
Almaani S, Meara A, Rovin BH. (2017). Update on lupus nephritis. Clinical Journal of the American Society of Nephrology. 12(5): 825-35.
Aragón CC, Tafúr R-A, Suárez-Avellaneda A, Martínez MT, de Las Salas A, Tobón GJ. (2020). Urinary biomarkers in lupus nephritis. Journal of Translational Autoimmunity. 3:100042.
Avihingsanon Y, Phumesin P, Benjachat T, Akkasilpa S, Kittikowit V, Praditpornsilpa K, et al. (2006). Measurement of urinary chemokine and growth factor messenger RNAs: a noninvasive monitoring in lupus nephritis. Kidney international. 69(4):747-53.
Chan R-Y, Lai F-M, Li E-M, Tam L-S, Chow K-M, Li P-T, et al. (2006). Imbalance of Th1/Th2 transcription factors in patients with lupus nephritis. Rheumatology. 45(8):951-7.
Foster MH, Kelley VR, editors. (1999). Lupus nephritis: update on pathogenesis and disease mechanisms. Seminars in nephrology.
Horwitz DA, Jacob CO. (1995). The cytokine network in the pathogenesis of systemic lupus erythematosus and possible therapeutic implications. Systemic Lupus Erythematosus. 51-70.
Inês L, Silva C, Galindo M, López‐Longo FJ, Terroso G, Romão VC, et al. (2015). Classification of systemic lupus erythematosus: Systemic Lupus International Collaborating Clinics versus American College of Rheumatology criteria. A comparative study of 2,055 patients from a real‐life, international systemic lupus erythematosus cohort. Arthritis care & research. 67(8):1180-5.
Jakiela B, Kosałka J, Plutecka H, Węgrzyn A, Bazan-Socha S, Sanak M, et al. (2018). Urinary cytokines and mRNA expression as biomarkers of disease activity in lupus nephritis. Lupus. 27(8):1259-70.
Lantelme E, Mantovani S, Palermo B, Campanelli R, Sallusto F, Giachino C. (2001). Kinetics of GATA‐3 gene expression in early polarizing and committed human T cells. Immunology. 102(2):123-30.
Lee YH, Song GG. (2017). Urinary MCP-1 as a biomarker for lupus nephritis: a meta- analysis. Zeitschrift für Rheumatologie. 76(4):357-63.
Liu L, Wang R, Ding H, Tian L, Gao T, Bao C. (2020). The utility of urinary biomarker panel in predicting renal pathology and treatment response in Chinese lupus nephritis patients. PloS one. 15(10): e0240942.
Lin Z-W, Wu L-X, Xie Y, Ou X, Tian P-K, Liu X-P, et al. The expression levels of transcription factors T-bet, GATA-3, RORγt and FOXP3 in peripheral blood lymphocyte (PBL)of patients with liver cancer and their significance. International Journal of Medical Sciences. 2015;12(1):7.
Mok CC. (2006). editor Therapeutic options for resistant lupus nephritis. Seminars in arthritis and rheumatism: Elsevier.
Mok CC. (2010). Biomarkers for lupus nephritis: a critical appraisal. Journal of Biomedicine and Biotechnology.
Noble A. (2000). Molecular signals and genetic reprogramming in peripheral T‐cell differentiation. Immunology. 101(3):289-99.
Mullen AC, High FA, Hutchins AS, Lee HW, Villarino AV, Livingston DM, et al. (2001). Role of T-bet in commitment of TH1 cells before IL-12-dependent selection. Science. 292(5523):1907-10.
Okpechi IG, Gcelu A, Ameh OI. (2015). Lupus nephritis: An approach to diagnosis and treatment in South Africa. South African Medical Journal. 105(12).
Rovin BH, Song H, Birmingham DJ, Hebert LA, Yu CY, Nagaraja HN. (2005). Urine chemokines as biomarkers of human systemic lupus erythematosus activity. Journal of the American Society of Nephrology. 16(2):467-73.
Rubinstein T, Pitashny M, Levine B, Schwartz N, Schwartzman J, Weinstein E, et al. (2010). Urinary neutrophil gelatinase-associated lipocalin as a novel biomarker for disease activity in lupus nephritis. Rheumatology. 49(5):960-71.
Satirapoj B, Kitiyakara C, Leelahavanichkul A, Avihingsanon Y, Supasyndh O. (2017). Urine neutrophil gelatinase-associated lipocalin to predict renal response after induction therapy in active lupus nephritis. BMC nephrology. 18(1):1-8.
Szeto CC. (2017). Urinary mRNA and lupus disease flare. Nephrology. 22:27-30.
Szeto C-C, Tam L-S, Kwan BC-H, Lai K-B, Wang G, Li EK-M, et al. (2012). Monitoring of urinary messenger RNA levels for the prediction of flare in systemic lupus erythematosus. Clinica Chimica Acta. 413(3-4):448-55.
Trajceska L, Severova-Andreevska G, Dzekova-Vidimliski P, Nikolov I, Selim G, Spasovski G, et al. (2019). Complications and risks of percutaneous renal biopsy. Open access Macedonian journal of medical sciences. 7(6): 992.
Wang G, Lai FM-M, Tam L-S, Li EK-M, Kwan BC-H, Chow K-M, et al. (2009). Urinary FOXP3 mRNA in patients with lupus nephritis—relation with disease activity and treatment response. Rheumatology. 48(7):755-60.
Wilhelmus S, Bajema IM, Bertsias GK, Boumpas DT, Gordon C, Lightstone L, et al. (2016). Lupus nephritis management guidelines compared. Nephrology Dialysis Transplantation. 31(6):904-13.
Xiao J, Chodosh J. JNK regulates MCP-1 expression in adenovirus type 19–infected human corneal fibroblasts. Investigative ophthalmology & visual science. 2005;46(10):3777-82.
