การศึกษาการคงอยู่ของพลาสมิด pHentAI ใน Bacillus subtilis

Abstract

      โคลนยีนแบคเทอริโอซิน entAI จาก Enterococcus faecium N15 เข้าสู่ Escherichia coli DH5α และ Bacillus subtilis ISW1214 ด้วยพลาสมิดพาหะ pHY300PLK ให้ชื่อว่า pHentAI ซึ่งแสดงการคงอยู่ของยีนเมื่อศึกษาด้วย การตัดด้วยเอนไซม์ตัดจำเพาะ EcoRI และ XbaI และตรวจสอบด้วยอะกาโรสเจลอิเล็คโตรโฟรีซีส พบว่าประกอบด้วย ชิ้นยีนขนาด 4.87 kb ของ pHY300PLK และ 0.7 kb ของ entAI และยังคงแสดงการคงอยู่ของยีน entAI เมื่อทำการย้าย พลาสมิดลูกผสม pHentAI เข้าสู่ B. subtilis ISW1214 เมื่อศึกษาด้วยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส แต่พบว่า มีการถ่ายทอด พลาสมิดลูกผสมไปยังรุ่นลูกได้เพียงแค่ 6 รุ่น ภายใต้สภาวะที่ไม่มียาปฏิชีวนะ

        Bacteriocin gene, entAI, from Enterococcus faecium N15 was subcloned into E. coli DH5α by using pHY 300PLK as shuttle plasmid vector by means of transformation method. The recombinant bacteriocin gene, pHentAI, was digested with EcoRI and XbaI showed the structural stability, comprised of 4.87 kb fragment of pHY300PLK and 0.70 kb fragment of entAI gene when analysed by means of agarose gel electrophoresis. Then, pHentAI was transformed into B. subtilis ISW1214, showed the structural stability when analysed by means of polymerase chain reaction (PCR). The segregrational stability of pHentAI was approximately 6 passages under non-selective condition.