การพัฒนาวิธี Allele-specific PCR เพื่อตรวจสอบความหลากหลาย ทางพันธุกรรมของยีน VKORC1 แบบ -1639G > A และ 1173C > T สำหรับการรักษาด้วยยาวาร์ฟาริน
Article Sidebar
Main Article Content
บทคัดย่อ
ยาวาร์ฟารินเป็นยาต้านการแข็งตัวของเลือด ซึ่งมีช่วงการรักษาแคบ และความหลากหลายทางพันธุกรรมของยีน VKORC1 มีผลต่อการตอบสนองของยา โดยเฉพาะตำแหน่งสนิปส์ -1639G > A (rs9923231) และ 1173C > T (rs9934438) มีความจำเป็นต่อการศึกษาเพื่อพิจารณาปริมาณยาที่เหมาะสม งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาเครื่องหมาย Allele-specific PCR (AS-PCR) โดยออกแบบไพรเมอร์ที่จำเพาะต่อยีน VKORC1 เพื่อตรวจสอบความหลากหลายทางพันธุกรรมในตำแหน่งดังกล่าว พร้อมทั้งศึกษาสภาวะที่เหมาะสมของปฏิกิริยาพีซีอาร์ โดยใช้ความเข้มข้นของ MgCl2 1.25 มิลลิโมลาร์ ซึ่งเหมาะสมสำหรับทุกคู่ไพรเมอร์ ส่วนอุณหภูมิสำหรับ Annealing ต่างกันพบว่าอุณหภูมิ 65 องศาเซลเซียส เหมาะสมสำหรับไพรเมอร์คู่มิวแทนท์และไพรเมอร์คู่ควบคุมที่สนิปส์ตำแหน่ง -1639G > A ในขณะที่อุณหภูมิ 57 องศาเซลเซียส เหมาะสมสำหรับไพรเมอร์คู่ไวลด์ไทป์ และสนิปส์ตำแหน่ง 1173C > T ทุกคู่ไพรเมอร์ ผลผลิตพีซีอาร์ยืนยัน ผลด้วยวิธี DNA Sequencing ผลการทดสอบมีความสอดคล้องกัน 100 % กับลำดับเบสของยีน VKORC1 ดังนั้น AS-PCR ที่พัฒนาสามารถใช้ตรวจสอบจีโนไทป์ ของยีน VKORC1 เพื่อพิจารณาปรับปริมาณยาวาร์ฟารินในการรักษาได้
Article Details
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
References
Thongarporn, S. (2012). Prevalence of adverse drug reactions and factors affecting bleeding from warfarin usage in southern Thai patients. Master Thesis. Prince of Songkla University.
Charuchotekamol, A. (2010). Warfarin and genetic polymorphism. Thai Pharmaceutical and Health Science Journal, 5(2), 180–184.
Choicharnchaikul, S., Malathum, P., & Karnchanachari, S. (2008). The use of warfarin in older adults: a case study and caring. Ramathibodi Nursing Journal, 14(3), 366–384.
Ansell, J., Hirsh, J., Hylek, E., Jacobson, A., Crowther, M., & Palareti, G. (2008). Pharmacology and management of the vitamin K antagonists: american college of chest physicians evidence-based clinical practice guidelines (8th edition). Chest, 133(6 Suppl), 160S–198S. DOI: 10.1378/chest.08-0670.
Rettie, A.E., & Tai, G. (2006). The pharmacogenomics of warfarin: closing in on personalized medicine. Molecular Interventions, 6(4), 223–227. DOI: 10.1124/mi.6.4.8.
Limdi, N.A., Wadelius, M., Cavallari, L., Eriksson, N., Crawford, D.C., Lee, M.M., …Wagner, (2010). Warfarin pharmacogenetics: a single VKORC1 polymorphism is predictive of dose across 3 racial groups. Blood, 115(18), 3827–3834. DOI: https://doi.org/10.1182/blood- 2009-12-255992.
Sambrook, J.F., & Russell, D.W. (2001). Molecular cloning: A Laboratory Manual. (3rd Ed). New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press.
Liu, J., Huang, S., Sun, M., Liu, S., Liu, Y., Wang, W.,... Hua, W. (2012). An improved allele-specific PCR primer design method for SNP marker analysis and its application. Plant Methods, 8, 34 (2012). DOI: https://doi.org/10.1186/1746-4811-8-34.
Park, Y.H., & Kohel, R.J. (1994). Effect of concentration of MgCl2 on random-amplified DNA polymorphism. Biotechniques, 16(4), 652–656.